NY_T 2286-2012 番茄溃疡病菌检疫检测与鉴定方法
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ID： |
7A1020E4BF444F85ACB881B085A38DBF |
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1.28 |
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14 |
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日期： |
2024-8-13 |
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ICS 65.020,B 16 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 2286—2012,番茄溃疡病菌检疫检测与鉴定方法,Detection and identification for Clavibacter michiganensis subsp.,michiganensis(Sm\th) Davis et al.,2012-12-24 发布2013-03-01 实施,中华人民共和国农业部 发布,NY/T 2286—2012,刖 s,本标准按照GB 1. !给出的规则起草,本标准由农业部种植业管理司提出,本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)归ロ,本标准起草单位:全国农业技术推广服务中心、贵州省植保植检站、贵州省植物保护研究所,本标准主要起草人:王福祥、张忠民、袁洁、熊红利、吴石平、杨学辉、江兆春、耿坤、郑松、毛东、刘新,1,NY/T 2286—2012,番茄溃疡病菌检疫检测与鉴定方法,1范围,本标准规定了农业植物检疫中番茄溃疡病菌检疫检测及鉴定的技术方法,本标准适用于番茄溃疡病菌的检疫检测及鉴定,2规范性引用文件,下列文件对于本文件唾用是必バ帮刑。あ臂,件。凡是不注日期的引^^^（硏盘业（,GB/T 6682分つ实验新水變血方法,仅注日期的版本适用于本文,于本文,GB 15569 农,3术语和定义,下列术语用文件,鸟眼斑,番茄溃あ,溃疡斑,番茄溃オ,状的髓腔的ザ,原理,番茄溃疡病,子远距离传播。光,入植株,造成局部,状。该病原菌为害番沟,反应（PCR）检测结果是空,豊症荻、］,M菌嫉,边缘为形個鸟眼状的病,孔等自然孔口侵,艮斑’’的典型为害症,5试剂与材料,而、无水磷酸氢二钠（Na2HP（ム）、氯化钾,（KCD、无水磷酸二氢钾（KH2P（ユ）、无水磷酸氢二钾（KH2P。,）、氯化钠（NaCl）、无水亚硫酸钠,（Na2s（%）、氯化镁（MgCレ）、七水硫酸镁（MgS。?7Hユ。）、硼酸（RBO,）等,DAS - ELISA检测试剂（包被抗体、酶标抗体、包被缓冲液、PBST洗涤液、样品提取缓冲液、前标抗,体缓冲液、底物对硝基苯磷酸二钠、底物缓冲液、终止液）与mSCM选择培养基制备方法参见附录B,除另有规定,所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格,6仪器及用具,PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、酶标仪、恒温震荡仪、台式离心机、高压灭菌器、超净工作台、生化,1,法,NY/T 2286—2012,培养箱、电子天平及其他用于病害研究的实验室必备用具,7取样方法,7. 1田间植株取样,苗期至收获期如在田间发现疑似症状（参见附录A）,采集病部3份.5份送实验室鉴定。如未发,现疑似症状植株采用随机选点取样，每个点采集3个以上样品.样品注明采集时间、地点、采集人等信,息。送实验室检验,7.2调运种子和果实取样,散装或包装调运的番茄果实、种子丒按GB 15569进行取样.送实验室检验,8检疫鉴定,8. I症状鉴定,直接观察样品是否具有番茄溃疡病典型症状（参见附录A）,8.2 病原菌菌落特征鉴定,病原菌菌落特征鉴定方法见附录Co,8.3 酶联免疫吸附测定法,酶联免疫吸附测定法参见附录〇〇如采用市售的试剂盒.按说明操作,8. 4 PCR检测,PCR检测鉴定方法参见附录E。如采用市售的试剂盒.按说明操作.,9结果判定和报告,9. I结果判定,9.1. 1根据症状进行结果判定,表现的症状完全符合番茄溃疡病典型症状的样品.判定为番茄溃疡病病菌,9.1.2室内鉴定结果判定,当植株或种子样品上表现的症状不典型时.需进行以下检测并根据检测结果判定样品是否带有番,茄溃疡病病菌,9. 1.2. 1根据菌落特征鉴定结果判定,分离的病原菌在选择性培养基上的菌落特征符合C. 3描述的典型特征.且革兰氏染色为阳性的样,品.判定为样品带番茄溃疡病病菌.,9. 1.2.2根据酶联免疫吸附法鉴定结果判定,在阴性对照OD值く 0. 1,且阳性对照OD值大于阴性对照OD值2倍的前提下,样品孔。D值大于,阴性对照OD值2倍时.判定为阳性反应.即样品带番茄溃疡病病菌,9. 1.2.3根据PCR检测结果判定,观察电泳结果,在阳性对照在268 bp处有条带出现.且阴性对照无条带出现的前提下,待测样品在,268 bp处有条带出现,判断样品带番茄溃疡病病菌,9. 1.2.4综合结果判定,当情况复杂时可进行综合判定,以上3种室内鉴定方法中有两种鉴定结果为阳性时,可判定为番茄,溃疡病病菌,9.2 结果报告,将实验室检验鉴定结果填入《植物有害生物样本鉴定报告》（见附录F）.,2,NY/T 2286—2012,10除害处理,检验过程中使用的有关材料和用具,在使用完毕后须进行消毒和除害处理。经检疫鉴定后的种子,样品应保存在4セ冰箱内.叶片和果实样品应保存在ー2()で以下或冻干保存三个月;保存期满后,进行,灭活处理,3,NY/T 2286—2012,附录A,(资料性附录),番茄溃疡病基本信息,A. 1学名和分类地位,学名 Clavibacter michiganensis subsp. nn.cQgane九”s(Smith)Davis et al.，简称:CMM,分类地位:属厚壁菌门的微杆菌科(Microbacteriaceae),棒形杆菌属(C/a。7力ac/er),A. 2典型症状,A. 2. 1果实:番茄溃疡病菌侵染番茄果实后,果实上出现圆形病斑,中央浅褐色,边缘有白色晕圈,病,斑直径3 mm,形似鸟眼状的病斑。许多小病斑可联合成不规则的斑块,见图A. 1,A.2.2植株:番茄溃疡……
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